PeproTech细胞因子常见问题解答

 PeproTech研制出的无动物成分的重组蛋白(animal-free recombinant proteins)，是利用专有的无动物成分生产设施，在严格的无动物成分条件下生产出来，因此痕量的动物源性污染引发潜在问题的可能性被降至低，从而*达到临床前研究和细胞治疗用标准。PeproTech研发无动物成分的培养基添加物试剂盒(animal-free Media Supplement Kits)。这些试剂盒经改良设计，其中的无血清组分对多种哺乳动物细胞的生长有更好的维持能力。

优质的RUO细胞因子

        全长和*生物活性的RUO细胞因子是由我们经验丰富的蛋白质科学家内部开发的。该过程从我们的分子生物学实验室开始，进行基因设计和表达，然后到细胞银行，进行发酵/细胞培养，纯化，终进行QC测试。

大肠杆菌（E.coli）表达蛋白：

PeproTech拥有超过15,000平方英尺的发酵，蛋白质加工和净化设备，能够满足客户的需求。

细胞培养表达蛋白：

PeproTech拥有先进的细胞培养和蛋白质纯化设备，能够提供糖基化的*生物活性蛋白。

常见问题 - RUO细胞因子

每个产品的相关信息均在该产品随附的CoA(说明书)中，请仔细阅读这些信息，以获知溶解和存储的方法。

1. 你们的蛋白产品的稳定性如何？ 

除非在产品说明书中特别注明，我们的所有产品均为冻干粉，在室温条件下非常稳定。尽管如此，我们还是建议您将冻干产品保存在-20oC至-80oC。对于大多数产品，重悬后在4oC仅能短期保存。如想长期保存，请用含载体蛋白(如0.1% BSA)的溶液稀释已重悬的蛋白，然后分装、冻存于-20oC至-80oC。分装浓度要求不低于1 µg/ml，每管体积要求不小于10µl。务必注意，请避免反复冻融，因每次冻融均可能引起蛋白的部分变性。因此，我们建议分装的蛋白溶液冻融不要超过1次。

2. PeproTech重组蛋白的内毒素水平如何？

PeproTech大部分无动物成分级别蛋白的内毒素水平均保证低于0.01 ng/µg蛋白，即0.1 EU/µg蛋白。对于大多数非无动物成分级别的蛋白，内毒素水平保证低于0.1 ng/µg蛋白，即1 EU/µg。其实，许多蛋白的实际内毒素含量均低于上面标称的内毒素水平，具体信息请与我们的质量保证(QA)部门联系。

3. 为什么我在管中看不到蛋白团块？

与市场上的许多蛋白产品不同，PeproTech的产品中不含任何载体蛋白和其它添加物 (如BSA, HSA和蔗糖等)，并且常在含盐量的溶液中冻干，结果是微量的蛋白在冻干过程中会沉积在管壁上，形成蛋白薄膜，有时肉眼观察不到。我们建议，在打开管盖前用小离心机快速离心20-30秒，使附着在管盖或管壁上的蛋白团块聚集于管底。尽管可能看不到蛋白团块，但我们的质控程序保证每管中的蛋白含量准确无误。

4. 哪些细胞因子有种属交叉活性？

除少数例外，大多数人细胞因子对小鼠细胞均有活性，很多小鼠细胞因子也可作用于人，但反应的特异性可能低于对应的人细胞因子。IL-7等为数不多的人细胞因子作用于小鼠细胞时，甚至比对应的小鼠细胞因子活性还强。干扰素，GM-CSF, IL-3和IL-4等细胞因子的种属特异性很强，与其它种属细胞的交叉反应活性非常弱。相反，成纤维细胞生长因子(FGF)和神经营养素(neurotrophins)等高度保守，在不同动物种属细胞上均呈现良好的生物学活性。

5. ED50和units/mg均用来表示比活性(specific activity)，两者之间有什么关联？

ED50的定义是可诱导50%大反应的细胞因子浓度，而比活性(specific activity)是单位重量蛋白样品中所含的活性单位。比活性单位(Specific Activity Units)只能用于表示蛋白的效能，且仅适用于剂量反应曲线为S形的蛋白。

6. 比活性单位(specific activity units)和活性的单位(International Units)之间有什么关联？比活性单位和单位(IU)之间没有直接的关联，不能相互换算。

单位(IU)是与标准品的活性单位(即IU/ng)比对后得出的活性数值，后者是在世界卫生组织(WHO)领导的合作研究中确定的。WHO标准品由英国国家生物制品检定所(NIBSC)制备和提供。

简单地与标准品比对而得出的蛋白活性单位(IU)常会出现偏差，原因是每个蛋白厂家所用的活性检测方法很难一致，从而导致与标准品比对后得到的单位(IU)值相互间不具可比性。想要实现真正的可比性，必须建立标准的活性检测方法，以保证所得出的蛋白活性单位(IU)值仅与蛋白的质量有关，而与蛋白的来源无关。

7. PeproTech是怎样得到蛋白活性的单位(IU)值的？

在可能的情况下，PeproTech通过将自己的产品与对应的WHO标准品在自已的生物活性测试中进行多次平行比对来得出单位(IU)值。多次对比可保证我们能够排除因测试本身的不稳定性(如产品批次，使用方法和测试方案等的变异性)而导致的异常值的出现。经多次比对得出的结果可对我们产品的单位(IU)值进行可靠的定量。