二代测序 QC 全流程，这可能适合你的QC方案！！！

     在过去的数年间，二代测序（ NGS ）在几乎所有的遗传研究和诊断领域都发展为了一个强大的工具。而任何 NGS 实验成功的关键是初始 RNA 和 DNA 样本以及它们所生成的文库的质量控制（QC）。

二代测序(NGS)的建库流程是很长很复杂的，建库的每一步都建立在前一步的基础上，因而质量控制（QC）显得尤为重要。无论您的初始样本类型是什么，在整个实验流程中，确保靶标的完整性、大小和集中程度是构建高质量文库，进而获得准确、可重复的结果的关键。为了帮助您更好地确定实验流程，安捷伦汇总了各类初始样本的各种建库流程。

理想的 NGS 质 控步骤应易于操作、经济，并且对于浓度非常低的样品也能提供快速且无争议的结果。本质控方法是运用琼脂糖电泳法来判断样本的大小与完整性，该方 法成本低，但有种种局限性，具体就不在此赘述。确保样品“满足目标用途”的另一种方法是应用自动化的电泳分离，并进行荧光检测和自动数据分析。

测序过程中的关键 QC 步骤

• Fragmentation

片段化是将样本剪切成更小的片段的过程。可以通过酶切或超声的方法来实现。QC 是这里的一个重要步骤，以确保片段化的条件是合适的。

• Ligate adaptors

接头是已知的寡核苷酸序列，用于连接到未知的目标测序片段，提供测序引物结合区和样本识别码。接头连接后的 QC 可以确保接头成功连接到 DNA。

• Size selection

片段筛选的目的是去掉多余的引物和接头序列，获得需要的目标序列。QC 在这一步是至关重要的，可以确保后留下的是目标大小和足够浓度的文库。

• Normalize/pool

在文库制备结束时，必须对样本进行量化，以确定要加载到测序仪上的文库量。如果需要多个文库混合上机测序，QC 可以帮助提供稀释指导，确保加载到测序仪上的文库是均匀的，有利于提高数据的均一性。

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