细胞冻存是细胞培养的关键步骤。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。
随着细胞被冷冻至冰点以下,悬液中冰晶和溶质的浓度有所增加。如果冷却过程中,胞内水分可以渗出细胞,则可以减少胞内冰晶。通常1℃/min的降温速度可以促进此过程。但是,水分的丧失会导致细胞收缩,当这种收缩达到一定程度,又会导致细胞活性的剧烈下降。冷冻保护剂,如甘油或者二甲基亚砜(DMSO),可以缓解这种效应。细胞冻存的标准程序是在含有冷冻保护剂的培养基中,将细胞缓慢冷冻至–70℃,然后将冻存管转移到液氮中以保持低于–130℃的环境。
5%-10%的甘油和DMSO是冻存保护剂。虽然DMSO对细胞有毒性,但是与甘油相比,其渗入细胞的速度更快,而且冻存重复性更好(而且细胞复苏效率更好)。右旋糖酐系蔗糖是经肠膜状明串珠菌-1226(Leuconostoc mesenteroides)发酵合成的一种高分子葡萄糖聚合物,右旋糖酐-40(Dextran-40)别称低分子右旋糖酐,右旋糖酐40的重均分子量(Mw)应为32000~42000。右旋糖酐-40可以维持渗透压和 PiH , 提供适宜细胞存活的介质环境。
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品牌 | 货号 | 产品描述 |
OriGen | CP-10 | USP级 DMSO二甲基亚砜 |
OriGen | CP-70 | USP级 DMSO二甲基亚砜 |
OriGen | CD-50 | DMSO/Dextran/remainder water 55%二甲基亚砜,5%右旋糖酐40混合液 |
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